347 composition chimique de l'acier inoxydable L'ampleur du sang veineux ou capillaire, spécifique du SRAS-CoV-2, des réponses des lymphocytes T détermine l'immunité contre le COVID-19.

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Composition chimique de l'acier inoxydable 347

Composition chimique du tube de bobine en acier inoxydable 347

La composition chimique et les propriétés mécaniques du tube de bobine en acier inoxydable 347 sont les suivantes :
- Carbone – 0,030% maximum
- Chrome – 17-19%
- Nickel – 8-10,5%
- Manganèse – 1% maximum

Propriétés mécaniques du tube de bobine en acier inoxydable 347

Selon le fabricant de tubes en spirale 347 en acier inoxydable, propriétés mécaniques du tube en spirale 347 :
- Résistance à la traction (psi) – 75 000 min
- Limite d'élasticité (psi) – 30 000 min
- Allongement (% en 2″) – 25% min
- Dureté Brinell (BHN) – 170 maximum

Applications et utilisations du tube de bobine en acier inoxydable 347

• Tube de bobine en acier inoxydable 347 utilisé dans les moulins à sucre.
• Tube de bobine en acier inoxydable 347 utilisé dans les engrais.
• Tube de bobine en acier inoxydable 347 utilisé dans l'industrie.
• Tube de bobine en acier inoxydable 347 utilisé dans les centrales électriques.
• Tube de bobine en acier inoxydable 347 utilisé dans l'alimentation et les produits laitiers.
• Tube de bobine en acier inoxydable 347 utilisé dans les usines pétrolières et gazières.
• Fabricant de tubes en bobine en acier inoxydable 347 utilisé dans l'industrie de la construction navale.

On pense que les lymphocytes T spécifiques du SRAS-CoV-2 protègent contre l’infection et la progression du COVID-19, mais il n’existe aucune preuve directe de cela.Ici, nous avons comparé les mesures de sang total de cellules T positives à l'interféron-γ spécifiques du SRAS-CoV-2 avec des résultats positifs aux tests de diagnostic COVID-19 (PCR et/ou flux latéral) dans les 6 mois suivant la collecte de sang de Lian.Parmi les 148 participants qui ont fait don d’échantillons de sang veineux, l’ampleur de la réponse des lymphocytes T spécifiques du SRAS-CoV-2 était significativement plus élevée chez ceux qui restaient protégés que chez ceux qui étaient infectés (P < 0,0001).% de risque d'infection, alors qu'une intensité élevée réduisait ce risque à 5,4 %.Ces résultats ont été généralisés à 299 participants supplémentaires qui ont testé un test sanguin capillaire évolutif qui pourrait faciliter l'accès aux données sur l'immunité des lymphocytes T à l'échelle de la population (14,9 % contre 4,4 %).Ainsi, la mesure des lymphocytes T spécifiques du SRAS-CoV-2 peut prédire le risque d’infection et doit être évaluée lors de la surveillance du statut immunitaire des individus et de la population.
Mesurer et comprendre la réponse immunitaire à l’infection par le SRAS-CoV-2 est important pour développer de futures stratégies efficaces visant à minimiser les impacts sur la santé publique et l’économie des futures épidémies de COVID-19.L'identification des corrélats immunitaires fournira des informations importantes sur la susceptibilité d'une population à l'infection virale, éventuellement une alerte précoce en cas de pic d'hospitalisations, et permettra également aux personnes de gérer personnellement leur risque d'infection et celui d'infecter autrui.La surveillance immunitaire s'est avérée essentielle pour évaluer l'efficacité des vaccins contre la COVID-19 chez les patients sains et à haut risque1,2,3, en particulier chez les mutants du SRAS-CoV-24, et la détection des personnes immunodéprimées nécessitera de renforcer l'immunité. Se faire vacciner et prévenir futures épidémies.
Le niveau d'immunité d'un individu contre l'infection par le SRAS-CoV-2 dépend de plusieurs facteurs : la charge virale au moment de l'exposition, les variantes du virus, l'âge, le statut vaccinal/infectieux antérieur, les comorbidités, les médicaments et, surtout, l'infection par le SRAS-CoV. .2 La réponse immunitaire adaptative se produit au moment de l’exposition au virus5.L'évaluation de la réponse immunitaire à l'infection par le SRAS-CoV-2 et/ou à la vaccination s'est concentrée sur des tests sérologiques qui mesurent la présence d'anticorps spécifiques d'une protéine structurelle (par exemple la glycoprotéine de pointe).Cependant, la présence ou l’absence d’anticorps à elle seule ne détermine pas avec précision une réponse immunitaire protectrice, car les réponses sont considérablement atténuées au fil du temps6 et de la neutralisation des variantes du SRAS-CoV-2 chez les individus en convalescence ou doublement vaccinés. Faible activité, ce qui pourrait conduire à un nombre d’infections révolutionnaires7.En effet, la protection contre le COVID-19 symptomatique provoqué par le variant Omicron (B.1.1.529) a diminué à environ 10 % après seulement 4 à 6 mois de vaccination par ARNm, bien que la protection contre une maladie grave ait persisté > 68 % pendant au moins 7 mois8.La mesure des réponses des lymphocytes T à mémoire adaptative, qui confèrent une protection à long terme contre l'infection virale, est le meilleur indicateur de la susceptibilité à l'infection par le SRAS-CoV-2, et donc une meilleure indication du risque d'être testé positif au COVID-199, puisque les cellules T spécifiques les cellules peuvent prévenir l’infection.sans séroconversion10,11.Cependant, la mesure des réponses des lymphocytes T a reçu moins d'attention en raison de difficultés méthodologiques et de problèmes logistiques liés à l'obtention et au transport d'échantillons de sang veineux, en particulier lors de la réalisation de vastes études observationnelles visant à évaluer l'efficacité des vaccins et à surveiller l'immunité.Cependant, les individus vaccinés présentent une activité robuste des lymphocytes T contre les variantes du SRAS-CoV-2, compensant potentiellement la perte de réactivité des anticorps pour limiter la gravité du COVID-1912,13.
Ici, nous avons cherché à comprendre si une seule mesure de la réponse des lymphocytes T du SRAS-CoV-2 pouvait prédire le risque absolu d’infection par le SRAS-CoV-2 dans les 6 mois suivant le prélèvement sanguin, quels que soient les facteurs d’influence immunitaire antérieurs.Afin de rendre le test des lymphocytes T à haut débit et applicable à des études plus vastes, nous avons également essayé de rendre le test miniaturisé afin qu'il puisse être effectué à l'aide d'un échantillon de sang capillaire prélevé au doigt.
Nous avons mesuré les réponses immunitaires cellulaires et humorales chez des donneurs sains en utilisant une détection combinée des cellules T du SRAS-CoV-2 et des anticorps IgG basée sur le sang veineux total (pour les caractéristiques des participants, voir le 14 mars 2022. Chez les donneurs vaccinés, le SRAS-CoV-2- les réponses cellulaires T spécifiques ont été déterminées en mesurant les taux plasmatiques d'interféron-γ (IFN-γ) après stimulation du sang total avec le peptide SARS-CoV-2 (comme précédemment, réf. 14, 15, 16, 17, 18) et les réponses IgG associées avec la nucléocapside (N) ont augmenté chez ceux qui ont signalé une infection antérieure, bien que les deux réponses aient été plus élevées chez les donneurs non vaccinés précédemment infectés, maximales dans le corps (Fig. 1a, b).Réponses IgG contre les glycoprotéines de pointe (RBD, S1, S2) étaient les plus élevés chez les donneurs précédemment vaccinés (Figure 1c – e).
a Les réponses des lymphocytes T IFN-γ+ spécifiques au SRAS-CoV-2 ont été mesurées par test sur sang total veineux et basées sur les vaccinations des participants et leur statut d'infection antérieur par le SRAS-CoV-2 (confirmé par PCR et/ou test de flux latéral)' Vac + /Inf +' n = 60 (vert), 'Vac + /Inf-' n = 82 (bleu), 'Vac-/Inf +' n = 4 (jaune), 'Vac-/Inf-' n = 1 (pas appliqué).Les réactions de liaison aux IgG spécifiques du SRAS-CoV-2 ciblent la nucléocapside (« N ») (b ; ****P < 0,0001, ** P = 0,0016), le domaine de liaison au récepteur enrichi (« RBD ») (c ; ** P = 0,0022, *P < 0,015), sous-unité de pointe 1 (« S1 ») (d ; ***P = 0,0005, *(Vac + /Inf+ vs. Vac + /Inf-) P = 0,022, *(Vac- /Inf+ vs. Vac+/Inf-) P = 0,012) et la sous-unité maximale 2 (« S2 ») (e) ont été mesurées par des analyses de sang total veineux et basées sur la vaccination des participants et le SRAS-CoV-2 antérieur (confirmé par PCR et/ ou test de flux latéral) statut infectieux.'Vac + /Inf +' n = 60 (vert), 'Vac + /Inf-' n = 71-82 (bleu), 'Vac-/Inf +' n = 4 (jaune).Les comparaisons ont été effectuées à l'aide du test de Kruskal-Wallis, ajusté pour des comparaisons multiples à l'aide du test de Dunn.Les données sont affichées sous forme de graphiques (ligne centrale à la médiane, limite supérieure au 75e centile, limite inférieure au 25e centile) avec des moustaches aux valeurs minimales et maximales.Chaque point représente un donateur.Les données brutes sont fournies sous forme de fichiers de données brutes.
Après un prélèvement sanguin, les participants ont été invités à déclarer eux-mêmes des résultats positifs aux tests PCR et/ou à flux latéral pour le COVID-19 ;si les participants ont été testés positifs entre le 1er septembre 2021 et le 29 décembre 2021, ils étaient présumés infectés par le coronavirus variant Delta (B.1.617.2) et Omicron (B.1.1.529) selon Public Health Wales après le 29 décembre 2021, date à laquelle cette option de préoccupation devient dominante.Parmi 148 donneurs évaluables, nous avons observé un taux d'infection de 26,3 % (39/148) dans les 6 mois suivant le don de sang, dont 38 ont reçu une deuxième ou une troisième dose du vaccin COVID-19 (la percée de l'infection s'est produite après Pfizer/BioNTech ( BNT162b2) vaccin à ARNm ou vaccin AstraZeneca (ChAdOx1 nCoV-19)) ;un donneur non vacciné a également été infecté.L'ampleur des réponses des lymphocytes T positifs à l'IFN-γ spécifiques au SRAS-CoV-2 était significativement plus faible chez ceux qui ont signalé un test de diagnostic positif pour le COVID-19 que chez les donneurs non infectés (P < 0,0001 ; Fig. 2a), principalement en raison de induction optimale des réponses des lymphocytes T par vaccination chez certains participants (P = 0,050 ; Fig. 1 supplémentaire).Il n’y avait aucune corrélation entre l’ampleur de la réponse des lymphocytes T IFN-γ+ et le délai d’obtention d’un résultat positif au test COVID-19 (Figure 2 supplémentaire).En revanche, ni les réponses IgG de liaison RBD, S1, S2 (Figures 2b à d) ni les réponses en anticorps neutralisant RBD, S1 n'étaient spécifiques du SARS-CoV-2 de type sauvage ou delta (B.1.617).) (Fig. 3 supplémentaire) permet de distinguer les personnes à risque d'infection.Cependant, de faibles réponses IgG liées au N contre le SRAS-CoV-2 étaient corrélées au risque d'infection au COVID-19 (P = 0,0084 ; Figure 2e) ;ceux dont le test était positif étaient 85 % moins susceptibles (P = 0,00035 ; OR 0,15, 95).% IC : 0,047 à 0,39 (Figure 4 supplémentaire).
Des échantillons de sang veineux provenant de donneurs sains (n ​​= 148) ont évalué les réponses des lymphocytes T IFN-γ+ spécifiques du SRAS-CoV-2 (a ; ****P < 0,0001) et la liaison du récepteur Spike au SRAS-CoV spécifique. -2 relances.domaine (« RBD ») (b), sous-unité Spike 1 (« S1 ») (c), sous-unité Spike 2 (« S2 ») (d) et nucléocapside (« N ») (e ; **P = 0,0084) .Les participants ayant été testés positifs à la COVID-19 (PCR et/ou flux latéral) identifiés ;toutes les infections sont survenues dans les 6 mois suivant le prélèvement sanguin.Les comparaisons ont été effectuées à l'aide d'un test bilatéral de Mann-Whitney.Les données sont affichées sous forme de graphiques (ligne centrale à la médiane, limite supérieure au 75e centile, limite inférieure au 25e centile) avec des moustaches aux valeurs minimales et maximales.Chaque point représente un donateur.ns n’est pas important.La carte thermique f montre les corrélations de rang de Spearman entre les variables pour l'ensemble de données spécifié.Les comparaisons qui n'étaient pas statistiquement significatives ont été exclues de la matrice et marquées de cellules vides.Les données brutes sont fournies sous forme de fichiers de données brutes.
Le seuil diagnostique positif prédéfini de 14 a été considéré comme trop arbitraire pour évaluer le risque de réinfection, c'est pourquoi des intervalles interquartiles ont été établis pour établir des paramètres de risque absolus.Le modèle statistique, qui comprenait uniquement les variables ayant un effet significatif sur les résultats, a montré que l'ampleur de la réponse des lymphocytes T IFN-γ+ spécifiques du SRAS-CoV-2 était le biomarqueur immunitaire le plus important pour déterminer les chances d'un individu d'être infecté. testé pour le COVID.-19 positif (Figure 2f et Figure supplémentaire 4).Patients présentant une réponse des lymphocytes T IFN-γ+ spécifiques du SRAS-CoV-2 dans le troisième (194-489 pg/ml d'IFN-γ) et le quatrième (> 489 pg/ml d'IFN-γ) quartiles 65 % (P = 0,055 ; OR 0,35, IC à 95 % : 0,11 à 1,00) et 90 % (P = 0,0050 ; OR 0,098, IC à 95 % : 0,014 à 0,42) avaient plus de participants.Les chances sont minces (Fig. 4 supplémentaire).Dans l’ensemble, les participants présentant une réponse des lymphocytes T spécifiques au SRAS-CoV-2 provenant du sang veineux ≤ 79 pg/mL d’IFN-γ présentaient un risque de 43,2 % d’infection par percée à 6 mois, par rapport à une réponse > 489 pg/mL.ml d'IFN-γ présentaient un risque d'infection de 5,4% (tableau 2).
Les analyses de sang total veineux ont une portée limitée en raison de la nécessité de prélever des échantillons par le phlébotomiste.Pour augmenter la disponibilité des tests de lymphocytes T et d'IgG pour le SRAS-CoV-2, une méthode alternative de prélèvement de sang capillaire a été développée pour permettre aux participants d'obtenir des échantillons de sang par piqûre au doigt à domicile.À notre connaissance, aucun rapport n’a été publié sur la mesure de la fonction des lymphocytes T spécifiques de l’antigène dans des échantillons de sang capillaire.Une forte corrélation a déjà été démontrée entre les nombres de lymphocytes obtenus à partir d’échantillons de sang capillaire et veineux comparables.En outre, il a été rapporté que les tests basés sur le sang total mesurant les réponses des lymphocytes T spécifiques du SRAS-CoV-2 utilisent seulement 320 μL de sang veineux20, éliminant ainsi les inquiétudes concernant la fréquence des lymphocytes T progéniteurs dans les échantillons de sang capillaire.
Nous avons utilisé ce test collaboratif standardisé à haut débit de cellules T du SRAS-CoV-2 et d'anticorps IgG basé sur du sang total capillaire pour mesurer la réponse immunitaire cellulaire et humorale chez les participants présentant diverses comorbidités et un statut vaccinal/infectieux antérieur (Tableau 1).recrutés dans tout le Royaume-Uni entre le 24 janvier et le 14 mars 202214. La majorité (90,9 %) des échantillons de doigts ont été correctement obtenus et envoyés au laboratoire dans les 24 heures suivant le prélèvement.Dans certains cas, des échantillons ont été reçus dans les 48 heures suivant le prélèvement sanguin, mais aucun de ces échantillons n'a passé les contrôles de qualité et n'a pas affecté les mesures globales des lymphocytes T ou des anticorps (Fig. 5 supplémentaire).Bien qu'il y ait eu des différences dans l'ampleur de la réponse des lymphocytes T IFN-γ+ spécifiques au SRAS-CoV-2 mesurée dans les échantillons de sang capillaire et veineux respectifs chez certains individus, il n'y avait globalement aucune différence significative (P = 0,88 ; Fig. 6 supplémentaire ).).
Les réponses des lymphocytes T IFN-γ+ spécifiques au SRAS-CoV-2 ont été significativement augmentées chez les individus vaccinés qui ont également signalé une infection antérieure (P = 0,0001), mais pas significativement plus élevées que chez les individus donneurs non vaccinés précédemment infectés (P = 0,19, Fig. 3a).).Les réponses IgG contre la glycoprotéine de pointe (RBD, S1, S2) étaient significativement plus élevées chez les donneurs vaccinés que chez les donneurs non vaccinés, quel que soit le statut d'infection antérieur (Figure 3b-d).Il est intéressant de noter que la réponse moyenne des IgG liées à l'azote était la plus élevée chez les participants non vaccinés précédemment infectés par rapport aux participants vaccinés, bien que cela n'ait pas atteint un niveau significatif (Figure 3e).Parmi les donneurs non vaccinés et non infectés qui se sont auto-déclarés, 15 des 37 participants (40,5 %) étaient positifs pour les IgG liées à l'azote, au-dessus du seuil précédemment établi de 2,0 BAU/mL14 ;ces 15 participants Douze de ces patients ont été testés positifs pour la réponse des lymphocytes T IFN-γ+ au-dessus du seuil précédemment établi de 22,7 pg/mL d'IFN-γ14.Par conséquent, il est probable que ces participants aient déjà été infectés par le SRAS-CoV-2 et n’aient pas été testés pour le COVID-19 en raison d’un choix personnel, du manque de PCR et/ou d’équipement à flux latéral, ou qu’ils étaient asymptomatiques.Bien qu'il y ait une corrélation significative entre les réponses des lymphocytes T à l'IFN-γ+ et les niveaux d'IgG liées à N chez les donneurs non vaccinés (P = 0,0044 ; Figure supplémentaire, la réponse des IgG liées à N a diminué plus rapidement que la réponse des IgG liées à N, alors que la réponse à l'IFN-γ + Les réponses des lymphocytes T ont été maintenues quel que soit le statut vaccinal, bien que le nombre de donneurs 50 semaines après la provocation ait été faible (Fig. 8 supplémentaire). Le type de vaccination était généralement peu différent dans les réponses IgG observées spécifiques au SRAS-CoV-2, T cellules et associées au RBD, bien que les participants ayant reçu deux doses de BNT162b2 suivies d'une revaccination d'ARNm1273 aient montré des niveaux significativement plus élevés d'IFN-γ + Les lymphocytes T étaient plus sensibles au SRAS-CoV-2 que ceux ayant reçu deux doses de ChAdOx1 et BNT162b2 (Supplémentaire Fig. 9) De plus, les comorbidités signalées présentaient peu de différence globale dans les réponses observées des lymphocytes T par rapport aux donneurs sains (Fig. 10 supplémentaire).
Les réponses des lymphocytes T IFN-γ+ spécifiques du SRAS-CoV-2 ont été mesurées par test capillaire sur sang total et étaient basées sur les vaccinations des participants et sur leur statut infectieux antérieur par le SRAS-CoV-2 (confirmé par PCR et/ou test de flux latéral).'Vac + /Inf +' n = 42 (vert), 'Vac + /Inf-' n = 158 (bleu), 'Vac-/Inf +' n = 33 (jaune), 'Vac- /Inf-' n = 37 (gris).****P < 0,0001, ***P = 0,0001, *(Vac+/Inf- vs. Vac-/Inf-) P = 0,045, *(Vac-/Inf+ vs. Vac-/Inf-) P = 0,014 .Réactions de liaison des IgG spécifiques du SRAS-CoV-2 au domaine de liaison du récepteur de pointe (« RBD ») (b ; ****P < 0,0001, ns : non significatif), sous-unité de pointe 1 (« S1 ») (c ; * * **P < 0,0001, ns : non significatif), sous-unité de pointe 2 (« S2″) (d ; ****P < 0,0001, ***P = 0,0005, *P = 0,016) et nucléocapside (« N ») (e ; ****P < 0,0001, ns non significatif) ont été mesurés à l'aide d'une analyse de sang total veineux et sur la base des vaccinations des participants et du SRAS-CoV-2 antérieur (confirmé par PCR et/ou analyse du flux latéral). Les infections ont été subdivisées par statut.'Vac + /Inf +' n = 46 (vert), 'Vac + /Inf-' n = 182 (bleu), 'Vac-/Inf +' n = 34 (jaune), 'Vac-/Inf-' n = 37 (gris).Les comparaisons ont été effectuées à l'aide du test de Kruskal-Wallis, ajusté pour des comparaisons multiples à l'aide du test de Dunn.Les données sont affichées sous forme de graphiques (ligne centrale à la médiane, limite supérieure au 75e centile, limite inférieure au 25e centile) avec des moustaches aux valeurs minimales et maximales.Chaque point représente un donateur.Les données brutes sont fournies sous forme de fichiers de données brutes.
Comme auparavant, les participants ont été invités à signaler des résultats positifs de PCR et/ou de flux sanguin latéral pour le COVID-19 ;selon l'Agence britannique de la santé, les participants étaient présumés avoir été infectés par le coronavirus Omicron (B.1.1.529) au moment du test de la variante positive du virus, car il s'agissait de la variante dominante au Royaume-Uni pendant la période d'étude.Parmi 299 donneurs évaluables, nous avons observé un taux d’infection de 8,0 % (24/299) dans les trois mois suivant le don capillaire, dont sept n’étaient pas vaccinés.La proportion de comorbidités parmi tous les participants était plus faible chez ceux qui ont été testés positifs pour la COVID-19 (10,7 %) que chez ceux qui ont été testés négatifs pour la COVID-19 (24,4 %, tableau 1), ce qui peut être dû au fait que les participants avec certains les maladies sont plus prudentes et protègent contre les conséquences potentielles telles que le diabète et le cancer.Comme observé dans une cohorte de sang veineux, les cellules T positives à l’interféron-γ (IFN-γ) spécifiques du SRAS-CoV-2 ont été mesurées dans des échantillons de sang capillaire provenant d’individus signalant un test de diagnostic positif pour le COVID-19.L'ampleur de la réponse était significativement inférieure à celle des donneurs non infectés (P = 0,034 ; Figure 4a) en raison de l'induction relativement faible d'une réponse des lymphocytes T par vaccination et/ou infection antérieure (Figure 11 supplémentaire).De même, ni les réponses IgG de liaison RBD, S1, S2 (Figures 4b à d) ni les réponses en anticorps neutralisant RBD, S1 n'étaient spécifiques du SARS-CoV-2 de type sauvage ou delta (B. 1.617).(Figure 12 supplémentaire).Les individus présentant un risque significatif d’infection peuvent être identifiés.Contrairement à la cohorte veineuse, les réponses IgG liées au N ne différencient pas non plus le risque de COVID-19 (Figure 4e), ce qui suggère que la variante Omicron (B.1.1.529) augmente l'évasion immunitaire chez les individus précédemment infectés, comme décrit récemment 21. En revanche, la force de la réponse des lymphocytes T IFN-γ spécifiques du SRAS-CoV-2 était à nouveau la variable la plus importante pour déterminer les chances individuelles d’être testé positif pour le COVID-19 (Figure 4f).Dans l’ensemble, les participants présentant une réponse des lymphocytes T capillaires spécifiques au SRAS-CoV-2 ≤ 23,7 pg/mL d’IFN-γ présentaient un risque d’infection de 14,9 % à trois mois, contre une réponse > 141,6 pg/mL.ml d'IFN.-γ avait un risque d'infection de 4,4% (Tableau 2).
Réponses des lymphocytes T IFN-γ+ spécifiques du SRAS-CoV-2 (a ; *P = 0,034) et du domaine de liaison au récepteur ciblé par les IgG (« RBD ») spécifiques au SRAS-CoV-2 (b), sous-unité de pointe 1 (' S1 ') (c), sous-unité de pointe 2 ('S2') (d) et réaction de liaison à la nucléocapside ('N') (e).Les participants identifiés comme positifs aux tests COVID-19 (PCR et/ou test de débit sanguin latéral), toutes les infections sont survenues dans les 3 mois suivant le prélèvement sanguin.Les comparaisons ont été effectuées à l'aide d'un test bilatéral de Mann-Whitney.Les données sont affichées sous forme de graphiques (ligne centrale à la médiane, limite supérieure au 75e centile, limite inférieure au 25e centile) avec des moustaches aux valeurs minimales et maximales.Chaque point représente un donateur.ns n’est pas important.La carte thermique f montre les corrélations de rang de Spearman entre les variables pour l'ensemble de données spécifié.Les comparaisons qui n'étaient pas statistiquement significatives ont été exclues de la matrice et marquées de cellules vides.Les données brutes sont fournies sous forme de fichiers de données brutes.
Alors que nous entrons dans la prochaine phase de la pandémie de COVID-19, l’accent passera de la prévention à la gestion des risques individuels et à l’identification des membres vulnérables de la société.L’établissement de corrélats d’immunité contre le COVID-19 est essentiel pour identifier et traiter efficacement ces groupes à haut risque.Il existe désormais de plus en plus de preuves que l’immunité des lymphocytes T protège contre l’infection par le SRAS-CoV-2 et limite la gravité du COVID-1910.Les données présentées ici démontrent que la force combinée des réponses des lymphocytes T IFN-γ+ spécifiques du SRAS-CoV-2 contre les protéines structurelles de pointe, de membrane et de nucléocapside confèrent une plus grande protection contre le COVID-19 que la liaison des anticorps.19 favorisent ou neutralisent les réponses. .et doivent être pris en compte lors de l’évaluation de l’immunité individuelle et/ou collective.Les virus à ARN tels que le SRAS-CoV-2 ou le virus de la grippe A (IAV) évitent la neutralisation sérologique en évoluant rapidement des épitopes de cellules B exposés sur les antigènes de surface reconnus par les anticorps.La réponse immunitaire protectrice fournie par les lymphocytes T peut refléter le ciblage d’épitopes provenant de régions plus conservées de protéines virales qui ne peuvent pas échapper rapidement à une réponse immunitaire.La protection médiée par les lymphocytes T contre les nouveaux variants du SRAS-CoV-2 est similaire à la protection hétérosubtypique médiée par le ciblage des lymphocytes T des protéines intrinsèques conservées observées dans les sous-types IAV22,23.
Malgré l’énorme potentiel de mesure de la réponse immunitaire cellulaire au COVID-19, relativement peu d’attention a été accordée au développement de tests précis, à haut débit et standardisés sur les lymphocytes T.Les complexités et les coûts traditionnels associés à la mesure des réponses des lymphocytes T empêchent la détermination précise de l’immunité des lymphocytes T lors du dépistage de l’immunité d’une large population.Bien que plusieurs tests commerciaux de stimulation peptidique du sang total soient récemment devenus disponibles, tout le monde a actuellement besoin d'un phlébotomiste pour obtenir du sang, ce qui limite la disponibilité et l'échelle.Les systèmes sanguins capillaires sont largement utilisés pour déterminer la prévalence des anticorps du SRAS-CoV-2 dans une population.Nous avons adapté les analyses de sang capillaire pour effectuer des analyses de stimulation peptidique sur sang total afin d'évaluer la réactivité des lymphocytes T aux protéines structurelles du SRAS-CoV-2 et aux réponses en anticorps spécifiques du SRAS-CoV-2.En fait, la mesure combinée des anticorps spécifiques du SRAS-CoV-2 et des lymphocytes T dans le même échantillon de sang capillaire est très intéressante : (i) réduit le besoin de plusieurs tests sanguins par participant, (ii) améliore l'expérience et la compréhension des participants ;(iii) améliorer la logistique et réduire la duplication, (iv) réduire l'impact environnemental car moins de consommables de laboratoire et de livraison d'échantillons sont nécessaires.Bien que la réactivité globale de l'IFN-γ soit similaire entre les échantillons de sang veineux et capillaire appariés, elle a été observée comme étant plus faible dans la cohorte de sang capillaire des participants (Fig. 4a) que dans la cohorte de sang veineux (Fig. 2a).Valeurs d'IFN-γ Il existe plusieurs explications à ce résultat, à savoir qu'un grand nombre de participants présentant des comorbidités nécessitant un traitement immunosuppresseur ont été recrutés dans la cohorte de prélèvement de sang capillaire (Tableau 1) et que la viabilité et/ou la fonction des cellules T obtenues à partir de cellules vasculaires les échantillons peuvent être faibles, notamment compte tenu des conditions de stockage à long terme des échantillons avant la stimulation peptidique.
Le vaccin contre la COVID-19, actuellement largement disponible, offre la meilleure protection contre une maladie grave à la plupart des receveurs dans les 6 mois suivant la vaccination8.Il est encourageant de constater que malgré la faible neutralisation sérologique induite par le vaccin des variantes du SRAS-CoV-26,7, les réponses des lymphocytes T provoquées par la vaccination contre le SRAS-CoV-2 de type sauvage sont restées très réactives, alors que 25 autres sont apparues.Les données que nous présentons ici démontrent l’importance d’une évaluation plus large de l’immunogénicité des vaccins, en mettant en évidence les vaccins présentant une immunité insuffisante des lymphocytes T pour prévenir une infection soudaine et une transmission persistante du virus.Nous avons également observé que de nombreuses personnes non vaccinées recrutées dans la cohorte capillaire présentaient une réponse significative des cellules T spécifiques du SRAS-CoV-2 (et des IgG liant N) quelle que soit la vaccination précédente, ce qui est probablement dû à une infection antérieure.Plutôt que de vacciner les individus appropriés, leur risque d’infection devrait être évalué en fonction de leur statut vaccinal actuel et des choix éclairés effectués.
Les limites de cette étude incluent l'assurance que les participants ont auto-déclaré leur infection par le SRAS-CoV-2 après un prélèvement sanguin afin de déterminer la pertinence de l'immunité ;certains participants peuvent avoir une infection asymptomatique et ne peuvent pas subir de tests PCR et/ou à flux latéral pour le COVID-19.Notre ensemble de données manquait également d'informations sur les médicaments des participants au moment du prélèvement sanguin.De plus, étant donné que tous nos participants n’ont signalé que des symptômes légers/modérés ou aucun symptôme, il n’a pas été possible d’identifier à partir de notre ensemble de données des réponses immunitaires prédisant un risque accru de maladie grave et d’hospitalisation pour le COVID-19.Cependant, la présence de réponses des lymphocytes T CD8+ contre des épitopes spécifiques de la nucléocapside a récemment été associée à une protection contre les formes graves du COVID-1926.De plus, le test utilisé ici n’a pas mesuré les réponses des lymphocytes T à des protéines non structurelles spécifiques du SRAS-CoV-2 exprimées précocement, dont il a été récemment démontré qu’elles s’accumulent préférentiellement chez les travailleurs de la santé séronégatifs qui ont été en contact avec des patients infectés.Sur la base de ces travaux, compte tenu de la prévalence de la transmission communautaire au moment du recrutement et de la forte probabilité d’infection par contact dans la population, le nombre de lymphocytes T spécifiques du SRAS-CoV-2 trouvés dans nos tests semble également capable d’être éliminé.infections subcliniques dans nos cohortes.Enfin, nous n'avons pas mesuré la production d'interleukine 2 par les lymphocytes T car nos travaux antérieurs ont démontré une mauvaise identification des réponses des lymphocytes T spécifiques au SRAS-CoV-214, bien que les réponses spécifiques à l'IL-2 puissent indiquer une réactivité croisée préexistante.cellules associées à la défense contre l’infection par le SRAS-CoV-211.
Prises ensemble, ces données mettent en évidence la nécessité fondamentale d’études longitudinales à long terme intégrant les réponses des lymphocytes T spécifiques au SRAS-CoV-2 dans les mesures de l’immunité à l’échelle de la population.Ces efforts pourraient être facilités par le développement d’un nouveau test sanguin capillaire qui mesure la réponse des lymphocytes T.
Le projet de recherche a recruté des participants de février 2021 à mars 2022. La cohorte de donneurs sains (n ​​= 148) qui ont fait don d'échantillons de sang veineux était principalement composée de membres du personnel universitaire et d'étudiants participant au service de dépistage du COVID-19 de l'Université de Cardiff ou du personnel d'une école primaire de Cardiff.Tous les participants étaient par ailleurs en bonne santé et n'ont déclaré prendre aucun médicament immunosuppresseur (voir le tableau 1 pour les caractéristiques).La cohorte de participants ayant donné des échantillons de sang capillaire comprenait tous les donneurs volontaires (âgés de 18 ans et plus) de partout au Royaume-Uni.Entre le 24 janvier et le 14 mars 2022, 342 participants ont été inscrits à l’étude, dont 299 ont soumis des échantillons de sang au laboratoire.De nombreux participants n'étaient pas vaccinés et/ou ont signalé des comorbidités graves, notamment des maladies auto-immunes et un cancer (voir le tableau 1 pour les caractéristiques).Cette étude a reçu l'approbation éthique du comité d'éthique de la recherche de Newcastle et North Tyneside 2 (ID IRAS : 294246) et du comité d'éthique de la recherche de la faculté de médecine de l'université de Cardiff (réf. SREC : SMREC 21/01).Tous les participants ont donné leur consentement éclairé écrit avant l'inclusion.Les participants n'ont reçu aucune compensation pour leur participation à cette étude.
Des échantillons de sang veineux ont été obtenus par ponction veineuse dans des vacutainers (BD) d'héparine de lithium ou de sodium de 6 ou 10 ml.Des échantillons de sang capillaire ont été obtenus avec une lancette à doigt, puis collectés dans des microconteneurs d'héparine (BD).Un minimum de 400 µl de sang est requis ;tout échantillon inférieur à ce montant sera rejeté.D'autres raisons de rejet de l'échantillon comprenaient une coagulation massive et/ou une hémolyse et l'échec de la collecte de plasma visqueux pour analyse (Fig. 5 supplémentaire).Au total, 299 échantillons de sang capillaire étaient disponibles pour évaluer les réponses en anticorps, dont 270 échantillons étaient également disponibles pour évaluer les réponses des lymphocytes T.
Les réponses des lymphocytes T spécifiques du SRAS-CoV-2 ont été évaluées à l’aide du test COVID-19 Immuno-T (ImmunoServ Ltd) et réalisées comme décrit précédemment14.En bref, un vacutainer veineux d'héparine de sodium (BD) de 6 ml ou 10 ml a été prélevé sur chaque participant et traité en laboratoire dans les 12 heures suivant le prélèvement sanguin.Bien que la plupart des échantillons aient été traités dans les 24 heures, un sang capillaire de micro-saignement (BD) hépariné de 400 à 600 μl a été collecté dans les 48 heures suivant le prélèvement au doigt.Des échantillons de sang veineux et/ou capillaire ont été stimulés avec des pools de peptides distincts spécifiques du SRAS-CoV-2 (variant de type sauvage), comme décrit précédemment14.Cette bibliothèque de peptides contient 420 séquences 15-mères avec 11 acides aminés chevauchants couvrant l'ensemble de la protéine de pointe (S1 et S2) (S ; protéine NCBI : QHD43416 1), la phosphoprotéine de la nucléocapside (NP ; protéine NCBI : QHD43423 2) et la glycoprotéine membranaire (M ; Protéine NCBI : QHD43419 1) séquences codantes (appelées « bibliothèque de peptides combinatoires S-/NP-/M »).Tous les peptides ont été purifiés à > 70 %, dissous dans de l'eau stérile et utilisés à une concentration finale de 0,5 µg/ml par peptide.Les échantillons ont été incubés à 37°C pendant 20 à 24 heures.Les tubes ont ensuite été centrifugés à 5 000 x g pendant 3 minutes et environ 150 µl de plasma ont été collectés au sommet de chaque échantillon de sang.Conservez les échantillons de plasma à -20 °C pendant un mois maximum avant d’effectuer des tests de détection de cytokines/anticorps.
L'IFN-γ a été mesuré à l'aide de l'ensemble IFN-γ ELISA MAX Deluxe (BioLegend, numéro de catalogue 430116) et effectué conformément aux instructions du fabricant.Immédiatement après l'ajout de la solution d'arrêt (2N H2SO4), la microplaque a été lue à 450 nm à l'aide d'un lecteur de plaques BioLegend Mini ELISA.L'IFN-γ a été quantifié par extrapolation de courbe standard à l'aide de GraphPad Prism.Les valeurs inférieures à la limite de détection inférieure du test ont été enregistrées à 7,8 pg/ml, les valeurs supérieures à la limite de détection supérieure du test ont été enregistrées à 1 000 pg/ml.
Les anticorps IgG anti-SARS-CoV-2 RBD/S1/S2/N ont été mesurés à l'aide d'un panel Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 4-plex (Bio-Rad, cat. n° 12014634) et étiquetés selon instruction du fabricant .instructions .Les échantillons rapportant des valeurs supérieures à la limite de quantification ont été réanalysés à une dilution de 1 : 1000.L'intensité moyenne de fluorescence des billes a été mesurée sur un instrument Bio-Plex 200 (Bio-Rad).Les concentrations d'anticorps ont été calculées par le test à contrôle unique VIROTROL SARS-CoV-2 (Bio-Rad) et converties en unités d'étalon international de référence OMS/NIBSC 20/136 (BAU/mL) à l'aide du facteur d'étalonnage du fabricant.
Les anticorps neutralisants spécifiques aux sous-unités RBD et S1 contre les lignées SARS-CoV-2 de type sauvage et delta (B.1.617) du SRAS-CoV-2 ont été mesurés à l'aide du kit d'anticorps de neutralisation des variantes du SARS-CoV-2 humain Bio-Plex Pro (Bio -Rad , pièce n° 12016897), selon les instructions du fabricant.Mesurez l'intensité moyenne de la fluorescence sur le Bio-Plex 200 (Bio-Rad) et calculez le pourcentage d'inhibition (c'est-à-dire la neutralisation) à l'aide de la formule suivante :
Des tests de neutralisation infectieuse pour le SRAS-CoV-2 ont été réalisés comme décrit précédemment28.En bref, 600 PFU de SARS-CoV-2 de type sauvage ont été incubées avec des dilutions en série de 3 fois de plasma en double pendant 1 heure à 37°C.Le mélange a ensuite été ajouté aux cellules VeroE6 pendant 48 heures.Les monocouches ont été fixées avec 4% de paraformaldéhyde, perméabilisées avec 0,5% de NP-40 et incubées pendant 1 heure dans un tampon de blocage (PBS contenant 0,1% de tween et 3% de lait écrémé).L'anticorps primaire (anti-nucléocapside 1C7, Stratech) a été ajouté au tampon de blocage pendant 1 heure à température ambiante.Après lavage, un anticorps secondaire (IgG-HRP anti-souris, Pierce) a été ajouté au tampon de blocage pendant 1 heure.Les monocouches ont été lavées, développées à l'aide de Sigmafast OPD et lues sur un lecteur de plaques Clariostar Omega.Des puits sans virus, sans virus mais sans anticorps, et des sérums normalisés présentant une activité intermédiaire ont été inclus dans chaque expérience comme contrôles.
L'analyse statistique a été réalisée dans GraphPad Prism (version 9.4.1).La normalité de l'ensemble de données a été testée à l'aide du test de Shapiro-Wilk.Des critères non paramétriques ont été utilisés pour toutes les comparaisons.Le test de Mann-Whitney a été utilisé pour les échantillons non appariés.Tous les tests étaient bilatéraux avec un seuil de signification nominal de P ≤ 0,05.
L'analyse exploratoire initiale de l'ensemble de données a été réalisée dans R (version 4.0.3).Cela inclut le développement de la matrice de corrélation de rang univariée de Spearman, dans laquelle la corrélation entre deux variables est représentée par la taille et la couleur des carrés.La signification statistique entre les associations a été calculée à l'aide du rho de Spearman, où les valeurs ≤0,05 étaient considérées comme significatives.Les comparaisons qui n'étaient pas statistiquement significatives ont été exclues de la matrice et marquées de cellules vides.Les valeurs P ont été ajustées pour plusieurs comparaisons à l'aide de la correction de Holm.Un modèle de régression logistique binaire a été utilisé pour simuler l’effet des variables de l’ensemble de données sur la réponse positive au COVID-19.Les réponses des lymphocytes T IFN-γ et les scores de titre d’IgG anti-RBD/S1/S2/N ont été convertis en facteurs, où chaque individu a été attribué au quartile approprié pour chaque score.Après cela, un premier modèle de recherche a été développé en utilisant la fonction glm du progiciel statistique (V4.0.3).Les odds ratios dérivés de ce modèle original ont été extraits des coefficients du modèle à l'aide de la fonction 'odds_plot' du package OddsPlotty (V1.0.2).Lors du développement du modèle de validation croisée, nous avons utilisé la fonction « bestglm » du package bestglm (V0.37.3) pour limiter les biais des utilisateurs et garantir que le meilleur sous-ensemble de prédicteurs puisse être sélectionné.La méthode choisie était « exhaustive » et le critère d’information utilisé pour évaluer l’adéquation du modèle était l’AIC.Le même flux de travail décrit ci-dessus a été utilisé pour obtenir le rapport de cotes.
Pour plus d’informations sur la conception de l’étude, consultez le résumé de l’étude Nature lié à cet article.
Les lettres et les demandes de matériel doivent être adressées au Dr Martin Scarr ou au professeur Andrew Godkin.Cet article fournit les données originales.
Le code R utilisé pour créer des modèles statistiques est accessible au public sans demande29.Les informations de réimpression et les licences sont disponibles sur www.nature.com/reprints.
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